科普小課堂|Masson三色染色總踩坑？這些FAQ幫你 “避坑通關(guān)”！

更新時(shí)間：2025-12-12

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Masson三色染色總踩坑？這些FAQ幫你 “避坑通關(guān)"！

Masson三色染色的主要用途是什么？

用于區(qū)分組織中的膠原纖維（染藍(lán)色/綠色）、紅細(xì)胞/肌纖維/細(xì)胞質(zhì)（染紅色）和細(xì)胞核（染深棕/黑色）。常用于評(píng)估纖維化（如肝纖維化、腎小球硬化）、腫瘤間質(zhì)增生或肌肉病理研究。

經(jīng)典Masson三色染色的關(guān)鍵試劑是什么，分別有什么作用？

Bounis固定液

用于固定組織形態(tài)，效果良好，可以媒染膠原組織，增加染料滲透性和對(duì)比度（可使用改良媒染液替代）。

Weigert鐵蘇木素染色液

用于核染色，含鐵離子媒染，使蘇木素與核DNA牢固結(jié)合，耐酸清洗。

麗春紅品紅染色液

用于肌纖維染色，小分子酸性染料易滲透致密程度高的肌纖維將其染成紅色。

磷鉬酸

用于分化膠原纖維的麗春紅品紅染色效果，并強(qiáng)化膠原纖維疏松結(jié)構(gòu)，促進(jìn)苯胺藍(lán)結(jié)合，分化時(shí)間決定紅藍(lán)對(duì)比度。

苯胺藍(lán)染色液

用于膠原纖維染色，大分子酸性染料易滲透致密程度低的膠原纖維將其染成藍(lán)色。

弱酸溶液

用于麗春紅品紅和苯胺藍(lán)染色后清洗切片，弱酸性溶液可以起到固色作用，穩(wěn)定紅色與藍(lán)色著色。

G1346-改良Masson染色試劑盒相比于G1340-Masson染色試劑盒的優(yōu)勢(shì)是什么？

G1346優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在2個(gè)方面：

1. 使用天青石藍(lán)蘇木素，無(wú)需現(xiàn)用現(xiàn)配鐵蘇木素，操作更簡(jiǎn)單；

2. 使用環(huán)保無(wú)毒的媒染劑用于膠原纖維預(yù)處理，色彩更清晰鮮艷、纖維更加清晰、不易出現(xiàn)過(guò)染等。

兩款試劑盒均適用于組織的石蠟切片、冰凍切片等染色，且染色穩(wěn)定、色彩鮮艷。

G1340染色-小鼠腎石蠟切片

G1346染色-小鼠腎石蠟切片

G1340-Masson三色染色結(jié)束后整張片子整體顏色偏紫紅、膠原纖維藍(lán)色著色不清晰是什么原因？如何進(jìn)行調(diào)整？

原因分析1:

苯胺藍(lán)染色時(shí)間短、染色效果不夠，從而使紅色成為主導(dǎo)色，導(dǎo)致切片整體偏紫紅。

調(diào)整意見(jiàn):

可以嘗試增加苯胺藍(lán)染色時(shí)間，每次以30s為遞增單位或者在磷鉬酸分化后，快速用蒸餾水清洗3-5s，然后再進(jìn)行苯胺藍(lán)染色。

原因分析2:

磷鉬酸分化不足導(dǎo)致膠原纖維有殘留麗春紅品紅著色，苯胺藍(lán)后續(xù)染色效果不佳。

調(diào)整意見(jiàn):

可以嘗試增加磷鉬酸分化時(shí)間至2-3min。

G1340-Masson三色染色結(jié)束后整張片子整體顏色偏藍(lán)紫、肌纖維紅色著色不鮮艷是什么原因？如何進(jìn)行調(diào)整？

原因分析1:

苯胺藍(lán)染色時(shí)間長(zhǎng)、染色效果過(guò)度，從而使藍(lán)色成為主導(dǎo)色，導(dǎo)致切片整體偏藍(lán)。

調(diào)整意見(jiàn):

可以嘗試增加麗春紅品紅染色時(shí)間，同時(shí)減少苯胺藍(lán)染色時(shí)間（先以2min為基礎(chǔ)進(jìn)行染色，然后根據(jù)結(jié)果再調(diào)整時(shí)間）。

原因分析2:

磷鉬酸分化過(guò)度導(dǎo)致肌纖維紅色著色不牢，再進(jìn)行苯胺藍(lán)染色后被遮蓋。

調(diào)整意見(jiàn):

可以嘗試減少磷鉬酸分化時(shí)間至0.5-1min。

染色結(jié)果不能及時(shí)封片應(yīng)該如何保存？封片后可以保存多久？

如染色后不能及時(shí)封片，可以先將切片置于弱酸溶液里暫時(shí)保存幾個(gè)小時(shí)（若觀察到有明顯顏色溶出現(xiàn)象，需要及時(shí)拿出，然后梯度乙醇快速脫水封片），中性樹膠封片后的樣本一般可以保存至少6個(gè)月，但還是建議等樹膠凝結(jié)干燥之后及時(shí)拍照留存結(jié)果，防止長(zhǎng)期保存過(guò)程中蓋玻片污染從而影響后續(xù)觀察。

該試劑盒用于冰凍切片染色時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？

1. 由于冰凍切片較比石蠟切片易上色，而且不同組織的染色時(shí)間也不同，所以需要調(diào)整各步驟的染色/處理時(shí)間，對(duì)于易上色組織樣本，可將每一步的染色時(shí)間減半來(lái)染色；

2. 在苯胺藍(lán)染色這一步，需要用弱酸溶液將苯胺藍(lán)稀釋3-5倍后使用，否則容易出現(xiàn)過(guò)染現(xiàn)象；

3. 染色和清洗切片時(shí)，操作手法盡量輕柔小心，以免組織脫落或翻起；

4. 冰凍切片較石蠟切片組織厚好幾倍，最終呈現(xiàn)的染色結(jié)果鮮艷度可能會(huì)遜色于石蠟切片為正?，F(xiàn)象。

染色背景有雜質(zhì)或污濁是什么原因？

1. 脫蠟不充分，可能存在殘留蠟質(zhì)，建議增加烤片時(shí)間或更換新的二甲苯試劑或環(huán)保組織透明脫蠟液；

2. 試劑存在沉淀，如果不確定是否是沉淀，可以吸取50μL液體置于干凈的載玻片上，于顯微鏡下觀察是否有大量懸浮顆?；虿蝗苄晕镔|(zhì)，如果是沉淀，但不多，可以使用濾紙或針頭濾器過(guò)濾除雜后再使用。

石蠟切片染色封片放置幾天后出現(xiàn)褪色或顏色明顯變淺情況是為什么？如何避免這種現(xiàn)象？

可能由于封片前無(wú)水乙醇脫水和二甲苯透明步驟使用的試劑由于多次使用摻入了一定量的水分，導(dǎo)致紅色或藍(lán)色著色被溶解，建議更換新的乙醇和二甲苯進(jìn)行處理或者苯胺藍(lán)染色后弱酸清洗這一步驟，及時(shí)甩干水分，直接晾干后再用中性樹膠封片，不進(jìn)行脫水透明。

Q10

同一個(gè)組織的相鄰切片同時(shí)染色后出現(xiàn)顏色不一情況怎么辦？

由于Masson三色染色步驟繁多，如果是采取滴染方式，存在這種情況屬于正?，F(xiàn)象，由于人為操作誤差，在依次處理切片時(shí)會(huì)有一些細(xì)微時(shí)間差異導(dǎo)致著色程度有所偏頗。可以通過(guò)減少一次性染色處理的切片數(shù)量或者采取浸染（缸染或小型直立切片孵育盒）的方式進(jìn)行染色，盡量確保每一步處理的時(shí)間保持一致從而減少批間差異。浸染的試劑如麗春紅品紅染液和苯胺藍(lán)染液可以回收2-3次使用，但不推薦反復(fù)使用。

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