1、問：斜面低溫保藏法

 答：將待保藏的菌種接種在合適的斜面培養(yǎng)基上,在相應的條件下培養(yǎng)至得到充足的菌體或者孢子,隨后密封試管置于4攝氏度左右保存,具體保存溫度按照保存菌種設定.保藏時間依微生物的種類從1個月到4個月不等.此法適用范圍廣(細菌、霉菌、放線菌、酵母均適用),操作簡便,成本低廉,復蘇方便,人員能隨時對微生物的狀態(tài)進行觀察.缺點是保藏時間較短,需要經(jīng)常傳代處理,因連續(xù)傳代而容易引入基因突變或者雜菌,培養(yǎng)基的理化性質及微生物代謝產(chǎn)物等原因還會導致微生物性狀發(fā)生改變.因此斜面低溫保藏法適于短期保存常用菌株,而且應該與其他能夠長期保存菌株的方法相結合防止種系丟失.

2.問：液體石蠟保藏法

答：此法是斜面低溫保藏法的一種改進,只需將無菌干燥的液體石蠟注入上述培養(yǎng)好的斜面至高于斜面頂端1厘米處,再將試管密封,直立于4攝氏度左右冷藏保存,具體保存溫度隨菌種而變.注意要定期添加石蠟保證斜面處于液面以下.保藏時間至少可以達到1年(無芽孢細菌、酵母),甚至更長 。液體石蠟保藏法基本上克服了斜面低溫保藏法保存時間短的缺點,然而液體石蠟保藏法由于要試管直立保存,因此比較耗費空間,不便于攜帶。此法要注意以下兩點:①石蠟要保證無水,干熱160攝氏度,2h滅菌后的石蠟可直接使用,若是用高壓濕熱121攝氏度,20分鐘滅菌法滅菌,則要置于烘箱中至水分蒸發(fā),石蠟液體變澄清后再使用；②用接種環(huán)取種復蘇時,注意接種環(huán)要充分冷卻防止液體石蠟飛濺傷人.

3.問：半固體穿刺保藏法

答：配制半固體培養(yǎng)基,高壓濕熱滅菌后倒于無菌試管中至約1/3,待培養(yǎng)基凝固,用接種環(huán)從平面培養(yǎng)基上挑取單菌落,穿入培養(yǎng)基若干次.在合適的條件下進行培養(yǎng)至菌體旺盛生長,之后密封試管,根據(jù)菌種特點在4攝氏度左右或者涼爽干燥處保存.保存時間至少可以達到1年,對于有些菌種甚至能達到20年之久.